| 一、試劑盒組成 血凝素 1支 猴紅細(xì)胞(吸收用) 1支 猴紅細(xì)胞(試驗用) 1支 陽性血清對照 1支 陰性血清對照 1支 生理鹽水 1支 二、試劑盒檢測原理 麻疹病毒血凝抑制試驗原理:猴紅細(xì)胞上有麻疹病毒受體, 遇麻疹病毒可產(chǎn)生凝集現(xiàn)象。 這種紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象可被病毒(血凝素)懸液中加入的特異性免疫血清所抑制。若將抗體與病毒(血凝素)預(yù)先溫育后再加入紅細(xì)胞則不產(chǎn)生凝集,稱為血凝抑制。定量血凝素與不同稀釋度抗體(血清)作用后能*抑制血凝的zui高血清稀釋度,即為抗體效價。 病毒+猴紅細(xì)胞 —→ 凝集 病毒+抗體 —→ +猴紅細(xì)胞 —→ 凝集抑制 三、操作步驟 (一)吸收紅細(xì)胞和猴紅細(xì)胞懸液的配制:試劑盒中吸收紅細(xì)胞和猴紅細(xì)胞使用前,以生理鹽水洗3次,每次1500轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘,zui后經(jīng)2000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘,棄上清。壓積的吸收紅細(xì)胞用于處理待測血清;壓積的猴紅細(xì)胞用生理鹽水配成1%濃度用于正式試驗。 (二)血清處理:血清分離后取0.1mL,加等量生理鹽水于56℃水浴30分鐘滅活,每管加入經(jīng)2000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘處理的壓積吸收紅細(xì)胞0.015mL。充分搖勻后,4℃過夜,次日吸取上清液測定(此時血清稀釋度為1:2)。陽性、陰性參考血清的處理按照樣本處理方法進(jìn)行。 (三)濃縮生理鹽水使用時用蒸餾水10倍稀釋; 血凝素凍干粉用4ml的蒸餾水復(fù)溶; 對照血清使用時用 0.3ml的蒸餾水復(fù)溶; (四)血凝素滴定 1、效價滴定:血凝板1~10孔各加生理鹽水0.025mL,于第1孔加血凝素0.025mL,混勻后從第1孔移 0.025mL至第2孔,如此倍比稀釋至第9孔(1:2~1:512),第9孔混勻后棄去0.025mL液體,第10孔不加血凝素作為紅細(xì)胞對照,每孔補加1滴(0.025mL)生理鹽水,再于每孔各加0.025mL 1%猴紅細(xì)胞,zui終使每孔液體量為 0.075mL,振勻后置37℃1小時讀結(jié)果,血凝達(dá)++時的血凝素zui高稀釋度為其效價,即1個血凝單位。正式試驗時采用2個單位血凝素。 2、血凝素單位滴定:按上述效價將血凝素稀釋成2U (如血凝素效價為1:128,稀釋成1:64)、1U、1/2U、1/4U,各孔中用生理鹽水倍比稀釋,然后補加 0.025mL生理鹽水,再加0.025mL 1%猴紅細(xì)胞。振勻后,置37℃1小時判定結(jié)果,應(yīng)出現(xiàn)“++++、++、+、-”之凝集方能用于試驗。 (五)血凝抑制試驗 1、微孔U型血凝板中進(jìn)行。 2、2~10孔每孔加生理鹽水0.025mL,第10孔為血清對照。 3、1、2及10孔各加1:2處理好的血清 0.025mL,用移液器從第2孔開始稀釋使血清充分混勻后,吸0.025mL放入下1孔倍比稀釋至第8孔棄去0.025mL。 4、1~9孔各加2U血凝素0.025mL,第10孔加生理鹽水0.025mL,振勻后置37℃ 30分鐘。然后每孔加1%猴紅細(xì)胞0.025mL,振勻后置37℃1小時判定結(jié)果。 5、每次試驗設(shè)置陽性、陰性血清對照。操作方法與待測樣本相同。 四、結(jié)果的判定 應(yīng)先將血凝板傾斜待血清對照孔內(nèi)的紅細(xì)胞自由下滑呈淚滴狀時即讀結(jié)果。 紅細(xì)胞下滑與對照相同者為*抑制。*抑制的血清zui高稀釋度既抗體效價。血清對照不應(yīng)出現(xiàn)凝集否則判斷時應(yīng)慎重或再吸收。 五、注意事項 1、血凝素效價:本試劑盒所提供的血凝素效價為1:16。為確保實驗準(zhǔn)確性,進(jìn)行正式試驗前,應(yīng)進(jìn)行血凝素的效價滴定,并回滴以確定用于正式試驗的血凝素效價。血凝素復(fù)溶時顏色變化,不影響效價。 2、猴紅細(xì)胞的洗滌:由于在運輸過程中,可能造成少量猴紅細(xì)胞的破損,因此在猴紅細(xì)胞的洗滌過程中可能出現(xiàn)輕微融血現(xiàn)象,可適當(dāng)增加洗滌次數(shù)(如3~4次),結(jié)果不受影響。 3、生理鹽水為十倍濃縮液,使用時用蒸餾水十倍稀釋。 4、用作血清吸收的紅細(xì)胞不能用于正式試驗(即該紅細(xì)胞不能與麻疹血凝素產(chǎn)生凝集)。 六、儲存及有效期:本產(chǎn)品在 2~10℃保存,有效期為3個月。 |